היברידיזציה של דנ"א ושימוש באנזימי רסטריקציה לבדיקות גנטיות

מתוך ויקירפואה
קפיצה אל: ניווט, חיפוש
היברידיזציה של דנ"א ושימוש באנזימי רסטריקציה לבדיקות גנטיות
'
יוצר הערך פרופ' מוטי שוחט
 

לערכים נוספים הקשורים לנושא זה, ראו את דף הפירושיםבדיקות גנטיות

אנזימי רסטריקציה הם בדרך-כלל אנדונוקלאזות, המהוות חלק ממנגנון ההגנה של חיידקים נגד פלישת גורמים המכילים דנ"א. האנזים חותך את הדנ"א באתר קבוע לאחר שהוא מזהה קטע הסגולי לו (באורך 7-4 בסיסים, בדרך-כלל). מוכרים היום מעל ל-200 אנזימים כאלו היכולים לזהות 90 אתרים סגוליים שונים.

Southern blots

לאחר הפעלת אנזימי חיתוך משני צידי קטע דנ"א המכיל את הגן הרצוי, מריצים את הקטעים המתקבלים באלקטרופורזה על אגרוזה-ג'ל ומקבלים הפרדה לפי גודל המקטעים השונים. לאחר השרייה בתמיסה בסיסית (המעבירה את הדנ"א הדו-גילי לדנ"א חד-גילי) מניחים את האגרוזה-ג'ל בתמיסת מלח בריכוז גבוה. מניחים נייר של ניטרוצלולוזה על הג'ל ונייר סופג מעליו. הדנ"א החד-גילי עולה עם המים מתמיסת המלח ונקשר לנייר הניטרוצלולוזה.

התוצאה היא העתק של סידור הדנ"א שהיה בג'ל על פלטת הניטרוצלולוזה. הוספת mRNA או דנ"א הסגולי לגן הנבדק תגרום להצמדת (היברידיזציה) הגלאי למקטע המכיל גן זה. סימון רדיואקטיבי של הגלאי מאפשר זיהוי ישיר של הגן המבוקש, וקריאה מידית של משקלו המולקולרי. גן זה יופיע כמובן במקטע בעל משקל מולקולרי אחר, אם משתמשים באנזים חיתוך שונה. גלאים סגוליים לגן מסוים מופקים היום מסחרית באמצעות "השתלת" מקטעים (בשיטות הנדסה גנטית) מהגן ההומאני לפלזמיד של חיידק או נגיף, ואלו מכפילים עצמם עצמאית. ניתוח של גן בשיטה זו נמשך בדרך-כלל עד 10 ימים, ואיכותו נקבעת לפי הסגוליות הרדיואקטיבית של הגלאי, סוג נייר הניטרוצלולוזה ומשך החשיפה.

באותה צורה ניתן לעשות היברידיזציה במקום דנ"א עם הרנ"א - Northern blots, או עם החלבון - Western blots.

דוגמה ליישום שיטה זו בקליניקה היא בדיקת תסמונת ה-X השביר - בבדיקת Southern blot ניתן לקבוע את גודל אזור "החזרות" בגן, ומעל לגודל מסוים מדובר בתסמונת X-שביר.

ביבליוגרפיה

  • Buyse ML. Birth Defects Encyclopedia. Center of Birth Defects Information Services, Inc.
  • Emery AE, Rimoin DL. Principles and Practice of Medical Genetics. Churchill Livingstone,
  • Harper PS. Practical Genetic Counseling.. Butterworth-Heinemann Ltd.
  • Jones KL. Smith's Recognizable Patterns of Human Malformation. W.B. Saunders Comp. Philadelphia.
מקורות נוספים

אנציקלופדיה גנופדיה - למידע המיועד לציבור הרחב: אנציקלופדיה גנטית לייעוץ גנטי, מחלות גנטיות ובדיקות גנטיות בשפה העברית ובצורה המתאימה גם למידע עבור המשפחות


המידע שבדף זה נכתב על ידי פרופ' מוטי שוחט (יוצר\י הערך)